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禽多瘤病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的初步建立
2025-04-08 09:52 张杰,吕涵婧,刘云涛等 
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摘要:禽多瘤病毒主要感染鹦鹉幼雏,导致羽毛脱落和生长受阻,目前尚无有效治疗措施,早期准确的诊断对防控该病毒至关重要。本研究建立了一种针对禽多瘤病毒的SYBR Green荧光定量PCR检测方法。具体方法如下:选取禽多瘤病毒大T抗原编码基因作为靶标设计特异性引物,并构建含有大T抗原部分编码基因的重组质粒作为阳性标准品,通过梯度稀释建立标准曲线,公式为y=-3.621x+46.443,相关系数为0.9964,熔解曲线呈单一峰。在特异性试验中,分别应用该方法检测含有鹦鹉疱疹病毒、鹦鹉腺病毒和鹦鹉喙羽病病毒基因片段的3种假病毒以及含有禽多瘤病毒大T抗原基因的阳性标准品,结果显示除阳性标准品外,其他假病毒均未出现特异性扩增曲线,表明该方法特异性良好。在灵敏度试验中,分别应用该方法检测含有禽多瘤病毒大T抗原基因的5个阳性质粒标准品,浓度分别为5.9×10~4 copies/μL、5.9×10~3 copies/μL、5.9×10~2 copies/μL、5.9×10~1 copies/μL和5.9×10~0 copies/μL,结果显示该方法的理论检测下限为5.9×10~1 copies/μL。综上所述,...更多

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